今天给大家分享taqman技术专利,其中也会对chcut专利技术的内容是什么进行解释。
原理: PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
正常情况下他们不发出信号,在PCR扩增的时候他就会自己结合到目的基因上,然后通过Taq酶的外切酶活性将其切端而发出信号。TaqMan引物没什么特别,特别之处就是有第三方带有发光基团与淬灭基团的序列段。
温度与时间的设置:基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。
其原理类似于DNA的体内***,只是在试管中给 DNA的体外合成提供以致一种合适的条件---摸板DNA,寡核苷酸引物,DNA聚合酶,合适的缓冲体系,DNA变性、复性及延伸的温度与时间。
使荧光基团和淬灭基团分离,从而检测器可以接收到荧光信号。 淬灭染料引物法 原理: ***用荧光标记引物扩增,从而使荧光标记基团直接掺入PCR扩增产物中,依赖荧光能量共振传递。
Real-time qPCR中最常用的荧光探针为TaqMan探针,其基本原理是依据目的基因设计合成一个能够与之特异性杂交的探针,该探针的5端标记荧光基团,3端标记淬灭基团。
1、Taqman探针与引物之间的位置:Taqman探针应靠近上游引物,即Taqman探针应靠近与其在同一条链上的上游引物。
2、Taqman探针两端分别带有荧光基团和荧光淬灭基团,在正常状态下,探针上的荧光被淬灭,不发出荧光。开始进行PCR扩增后,探针被PCR酶水解,淬灭基团与荧光基团分离,有荧光信号释放出来。根据荧光信号,确认PCR扩增合成的DNA的量。
3、TaqMan探针技术解决了荧光染料与非特异性扩增结合的问题,反应结束后无需通过熔解曲线检测,缩短了实验时间。TaqMan探针技术的优点:荧光背景低;敏感性高;杂交稳定性高;荧光光谱分辨率好;特异性高。
4、SNP的检测方法介绍:TaqMan探针法:针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
1、现在SNP的常用检测方法主要有:Taqman法、质谱法、芯片法、测序法。
2、SNP的检测方法介绍:TaqMan探针法:针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
3、四)、焦磷酸测序法焦磷酸测序法是一种不依赖平板胶或毛细管电泳,不依赖DNA的荧光标记/激发/检测体系的序列分析技术,适用于已知SNP的序列验证及基因分型。
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